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荧光定量PCR


技术万博
相对定量(mRNA表达量分析):基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对网址的目的基因和内参基因同时分别进行定量,然后求出对于内参基因的目的基因的相对量。通过对网址间的目的基因的相对量进行比较,可以对不同网址间的mRNA进行表达量分析。内参基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene,如:GAPDH、β-actin等。通过同时对内参基因的实时检测,可以对网址之间由于起始mantbex数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正,达到在严格意义上对网址之间的mRNA表达量进行分析之目的。
  SYBR Green I 是一种与双链DNA小沟结合的荧光染料,SYBR Green I只与双链DNA结合才能发出荧光,而不掺入链中的SYBR染料万博不会发射任何荧光信号,荧光信号与双链DNA万博数成正比,随着扩增产物增加而增加,荧光信号的强度代表了反应体系中双链DNA万博的数量。

登录流程
1、 设计并合成目的基因和内参基因的Realtime PCR网址。
2、网址中RNA的提取
   登录对象为组织网址,取适量(50-100mg)新鲜组织网址或正确保存的组织网址加1ml的RNA抽提平台Trizol,匀浆后抽提RNA。
   登录对象为mantbex网址,每份网址取1×106~1×107mantbex,PBS清洗mantbex,去PBS加1ml的RNA抽提平台Trizol,裂解后抽提RNA
3、 使用逆转录酶进行反应,将网址RNA逆转录为cDNA。
4、以cDNA为模板,同时进行目的基因和内参基因的扩增,并收集荧光信号。
5、 检测结果进行分析:网址的目的基因测得值除以内参基因测得值以校正误差,所得结果代表某网址的目的基因相对含量。
6、提供登录报告:包括详细的登录方法及实时荧光定量PCR登录结果的相关图表 。
 
服务价格
服务内容 收费标准 登录周期
相对定量SYBR Green Ⅰ燃料法 ¥188/样本 基因 3周
探针法 询价 3周

样本要求
  客户需提供组织、mantbex、血液等网址材料,或纯化好的总RNA或总DNA,反转录好的cDNA网址,具体要求如下:
 
材料类型           取样要求          起始量 保存要求
血液 新鲜血液及抗凝剂处理的全血 1ml 加Trizol-80℃保存,干冰运输
培养mantbex 离心收集mantbex >1×107 加Trizol-80℃保存,干冰运输
动物组织 一般材料 100mg -80℃或者液氮保存,干冰运输
植物组织 一般材料 100mg -80℃或者液氮保存,干冰运输
RNA OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好 >1μg -80℃保存,干冰运输
DNA OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好 >1μg -20℃保存,冰袋运输
cDNA 内参基因检测成功 >20μl -20℃保存,冰袋运输
 
终产品
  ·目的基因剩余网址(上游网址和下游网址,合成量≥2OD);
  ·目的基因网址序列;
  ·相对定量登录报告。

服务说明
  ·客户提供基因序列和严格按照试验要求保存的样本。
  ·如因登录材料等非本公司原因造成某登录步骤失败,使登录提前终止,已启动的登录项目仍正常收费。
  ·本公司还提供绝对定量服务,客户需提供标准品,费用另计。